1977年，美国食品药品监督管理局批准使用鲎试剂（LAL）来检测无菌药品中的细菌热原。按照现在的科学和医学的水平来看，这个政策似乎有一些陈旧。但在当时的环境中却是一个全新的变革：在此前的四十年中，人们一直是通过向兔子的静脉注射药物并观察其体温变化来完成热原检测——俗称家兔热原检测法。用一种在地球上生活了4亿年之久并且完全不像人类的动物来代替兔热原试验，在当时的科学环境中是一个巨大的飞跃。这是数十位科学家不断重复试验所得出的结果，同时也证明了替代方法的可靠性是需要无数的人力时间和资源的。用萤光照亮微生物与鲎试验不同，萤火虫发光法是几十年前便发现的——它是通过重新构想自然生化过程的用途来筛选微生物污染物的一种方法。萤光素酶将萤光素（一种发光化合物）转换成氧化萤光素以在三磷酸腺苷（ATP）存在的情况下发光，就会发生ATP生物发光。科学家使用光度计测量生物发光反应，并将其与空白对照进行比较，以此来确定样品是否存在微生物污染物。自1980年代以来，ATP生物发光的结果已被用作可靠的快速检测试剂，用于筛查食品，饮料和其他消费产品中的微生物污染物，以及一些临床应用，例如肿瘤成像。ATP生物发光法能为质量控制环节带来哪些好处呢？传统的质量控制中生物负载或微生物限度（MLT）需要3–7天培养，无菌检测在微生物测试的每个节点都要进行14天以上的无附加值培养。如果发生污染，则需要额外的库存、产品搁置时间以及上市延迟，这会给生产过程带来不必要的风险。Charles River的快速检测解决方案采用Celsis AMPiScreen检测系统，该系统利用微生物酶反应以及ATP生物荧光技术实现快速微生物检测。Celsis®快速微生物检测方法在18-24小时内提供生物负载和微生物限度初筛结果，而无菌测试仅需6-7天即可提供结果，仅为传统方法所需时间的一半。除了加快检测时间，Charles River的Celsis®同时还有如下优势：● 缩短生产周期● 减少营运资金需求● 减少实验室浪费以提高可持续性● 对污染的反应更快、调查时间更短● 减少库存需求和安全库存通过创建更精简，快速响应和精益的制造流程，Celsis®快速微生物检测可提高供应链效率，减少污染响应和调查时间，并最大化生产和测试通量。快速的微生物检测系统提供多种尺寸供选择，可满足各种业务和行业的需求，并将改变您的经营方式。

USP Chapter 1085 FQA《美国药典》1085章节常见问题最新的《美国药典》(United States Pharmacopeia, USP) 章节 <1085>“细菌内毒素检测指南”填补了撤销 1987 年 FDA 指南并实施其替代问答后的监管空白。Charles River针对USP章节<1085>中的常见问题进行了以下回答，供您参考。USP 章节 <1085> 所述方法是否适用于全球，还是仅适用于美国？每个国家/地区均有自己的监管机构来提出参考指南和建议。USP 为美国编写并在美国执行，但其他国家/地区可以将 USP 材料作为官方监管的参考来源。USP 不应优先于各个国家/地区的书面指南和要求，但由于部分国家/地区没有提供官方汇编，所以 USP 可以作为一个值得信赖的监管参考来源。美国以外的任何生产商在向美国出口产品时均应当采用 USP，以确保其符合进口到美国的所有必要要求。分析人员是否应当定期接受内毒素检测资质确认 ，还是仅在最初接受资质确认即可？分析人员至少应当接受初始资质确认以表明其有能力实施内毒素检测，不过一些实验室还设定了分析人员再次接受资质确认的时间表。Charles River 提供了一项内毒素检测熟练度测试计划，每年开展 4 次，可用于分析人员再次接受资质确认 。此外，如果分析人员每天甚至每周都在实施内毒素检测，这些日常检查工作可以作为其有资质实施内毒素检测的证明。这最终取决于每个公司的决定。如果仅有一个批次可用于样品适用性/验证，应当怎么做？部分批次的产品几个月或几年生产一次。当然，这并非典型的情况，但在这种情况下，不能接受等待对后续批次一起进行验证，否则验证可能需要很多年才能完成。在此情况下，如果可以开展适当的风险评估，您可以在三个不同日期对一个批次进行验证，同时应当由三名不同的分析人员来实施测试。此后，每次对该产品进行测试时，您基本上都会收集更多数据，随着时间的推移，您可以对验证更具信心。当您对一个批次的产品进行验证测试时，请记住应包含其他测试，如中间产物或原材料测试。如 USP 章节 <1085> 所述，其确实表明，从以往的经验来看，三个批次可能足够也可能不够，这取决于某些因素。根据产品包装说明书计算内毒素限值时，其低于药典各论的限值，此时应如何确定产品原料的内毒素限值？当存在多种选择，应当总是选择最严格的限值。测试的目标是确保产品质量和患者安全，所以从患者角度来看，最安全的选择是更低的限值。确定进入最终产品的原料限值时，Charles River 和 USP 章节 <1085> 都建议开展风险评估。检查以下内容：原料来源、该原料历史内毒素含量、最终产品历史内毒素含量、最终产品百分比组成以及任何可能增加或减少内毒素水平的工序。例如，在进入最终产品前，将液体原料放置于温度较高的烘箱中；这一工序将减少内毒素，因此您可以为其设定一个较低的限值。风险评估将帮助您确定采用何种限值。在决定设定何种限值前，请确保您了解原料的干扰特性，以确保能够检测出该限值。最糟糕的情况是，您设定了一个限值，然后发现原料会对测试造成干扰，以至于您无法在 MVD/MVC 范围内获得有效的回收率。处理结果时，用线性回归还是多项式回归更好？线性和多项式各有其优点和缺点，并不意味着某一方更好。法规要求标准曲线的线性（R值）的绝对值应≥0.980。所以如果使用多项式回归，Charles River 建议首先用线性回归来确保曲线的有效性。Endosafe® EndoScan-V™ 软件内置此功能，如果 R 值并非线性，则不允许用户采用多项式。线性回归通常更加严格，即容错空间比多项式回归更少，这就是使用多项式前需要有效的线性回归的原因。如果由熟练的分析人员使用高质量的试剂和用具，对具有 2 或 3 个对数范围的曲线而言，线性回归通常足以满足要求。如果采用 FDA 认证的 Endosafe® 卡片技术，我们应当如何对分析人员进行资质确认？采用卡片技术时，应由实验室决定分析人员的资质确认规程。在 Charles River ，我们让分析人员使用卡片对LAL试剂用水（LRW）进行测试，以确保分析员能够获得有效的测试结果。对存在干扰和/或内毒素的已知样品进行测试也可以作为分析人员进一步资质确认的一种方式。Charles River 的熟练度测试计划将发运一小瓶含量未知的内毒素供分析人员进行测试。上传结果后，Charles River 将与客户联系，说明该数值是否准确。这是一种用于确认分析员资质的“设盲”方法，但每个实验室都必须自行决定采用 Endosafe® 卡片技术时如何对分析人员进行资质确认 。

Candida Auris耳念珠菌耳念珠菌（Candida Auris）是一种酵母菌，于 2009 年首次被发现。它极具传播性并会导致患者诱发严重疾病，尤其是耳念珠菌进入血液会迅速扩散到全身。这种全球性病原体也对大多数抗真菌药具有抗药性，使其难以治疗和管理。如何更好地鉴定耳念珠菌？耳念珠菌是一种经常被错误鉴定的真菌，使用表型鉴定法无法正确识别。因此，最好的鉴定方法包括 PCR、MALDI-TOF 和 ITS 测序。如果用以上鉴定方法可以避免鉴定错误、管理不善和耳念珠菌的进一步传播。重要信息• 耳念珠菌的名字来自拉丁语中的耳朵 (auris)。• 耳念珠菌于2009年在日本一名患者的耳朵中首次被发现。Charles River专业从事细菌和真菌鉴定以及环境监控分离物的菌株分型，采用最新的基于DNA序列和MALDI-TOF的技术，为全球 1000 多家工厂提供准确可靠的微生物鉴定服务。

制药行业的微生物实验室负责环境监测和污染控制。每个实验室每周都会产生数千个数据，这些数据的处理方式直接影响到患者的安全。监管部门希望微生物实验室遵守数据完整性的要求。数据完整性的定义是“在数据的整个生命周期内维护和保证数据的准确性和一致性，是存储、处理或检索数据的任何系统设计、实现和使用的关键因素。”实验室需要遵守 ALCOA+ 的数据完整性原则：信息必须可归属、清晰、同步、原始、准确、完备、一致、持久和有效。这不仅适用于基于纸张的系统，也适用于实验室所使用的计算机系统和软件。此项原则至关重要，因为这些检测承担着产品放行的责任。数据的修改或丢失可能会给患者带来风险。微生物实验室的数据完整性面临独特的挑战，从减少人为错误的角度着手可能更易于考虑数据的完整性。例如，微生物实验室的核心功能是计数生物负荷和采样板。由于这些是在琼脂培养皿上的活的微生物，我们该如何确保计数准确？我们又应该将什么视为原始数据？有一些公司为了应对这些问题，对采样板进行拍照，并使用“四眼”原则来验证原始计数。其他公司正转向使用自动计数阅读器，数据通过电子方式进行验证和存储。其他的例子包括表型微生物鉴定系统（其中生化和代谢检测根据颜色变化或浑浊度来读取）以及内毒素检测中的凝胶凝法。这些结果都是非常主观的，因为不同的技术人员可能会以不同的方式来解读结果。如果基于这些检测结果进行产品配置，将会带来准确性和复现性问题。因此，对所有微生物实验室功能进行数据完整性评估是至关重要的。减少实验室中的人为错误将有助于提高公司的数据完整性，从而增强监管状况。为此，许多实验室正转向采用自动化设备和实验室信息管理系统 (LIMS)，因为这可以最大程度地减少手写记录和不一致的地方。简化的工作流程可以显著加快检测速度，同时提供更可靠的数据。这些数据输出是可读的、与日期和时间戳同步、可归属于操作员登录、原始、准确并且一致。数据文件可以通过电子方式保存，以保持持久、有效和完备。FDA 最近的警告信中重申了数据完整性的重要性：“贵公司没有维护所有实验室检测的完整而准确的数据。如果没有可靠的实验室数据，就无法保证就批次放行、产品稳定性和其他药物质量方面做出适当的决策。”由于制造环境的控制状态是基于环境监测系统的，对产品放行来说至关重要。因此质控微生物实验室必须做到准确、可靠和及时地进行检测。

每个制药商的目标都是生产对患者安全有效的优质产品。环境检测（Environmental monitoring）在实现此目标中起着重要的作用——它提供了有关制造环境的关键信息，避免放行可能受污染的产品。 由于环境监测在制造过程中的重要性，相关机构围绕新兴市场的活动推出了许多法规要求和指南。这些标准随着制造环境不断变化，并且有越来越严格之势。虽然环境监测通常由微生物实验室执行，但其实与质量部门也紧密相关。作为制造商，可以通过降低与环境检测计划相关的风险，增强企业的监管地位，提高产品质量，同时确保患者安全。 那么我们该如何设计一个合适的质量风险管理体系呢？ 首先，公司应该对生产制造的设计和控制进行全面评估，并对所有微生物危害进行详尽而彻底的审查。这类风险评估并非一次性活动，而应根据环境监测数据定期进行评估。对于一个真正全面而可靠的环境监控程序来说，跟踪和趋势化分析以及微生物鉴定是了解生产环境的关键。 让我们以一个真实的案例来证明跟踪和趋势化分析对生产环境的重要性：一家制药公司的员工某天发现生产环境中芽孢杆菌有明显增加的趋势。由于芽孢杆菌是常见的孢子形成物，其产品是否已充分灭菌还是维持在孢子的形态？制造环境中清洁和卫生程序是否能够去除孢子？带着这些问题这家公司通过对菌群进行趋势分析，随后发现芽孢杆菌每年秋天都会大量繁殖，并且最终追踪溯源至其供热通风与空气（HVAC）系统。原来这家公司位于农村环境中，芽孢杆菌的增加与当地农场收割庄稼和破坏土壤的时间息息相关。该公司最终通过更换HVAC系统和HEPA过滤器以及增加杀虫剂的使用来减轻污染。 GMP指南中，欧盟关于“无菌药品生产（Manufacture of Sterile Medicinal Products）”的附件1是主要的指导文件。该文件不仅适用于欧盟的药物生产商，也适用于有欧盟客户的任何全球药物生产商。因此，即使起初附件1被视为一个严格的欧洲文件，现在它也适用于大多数制药商，并为所有环境检测和污染控制策略提供了合理的指导。 其次，微生物鉴定应在物种水平上进行，帮助制造商进行有效的趋势化分析并提供更有意义的数据。通过了解该微生物被采集的时间和地点，相关人员可以解析出该微生物是如何进入生产环境并提出补救的见解。此外，了解具体的物种可以对该微生物如何影响生产过程、最终产品和潜在患者进行更相关和全面的风险评估。 政府关于药品生产的法规旨在通过确保为患者提供安全有效的产品来保护大众。 通常来说，仅对一个生产批次的一小部分进行最终产品测试并不能完整地说明整个批次是否无污染。 因此，环境监测只是通过在整个生产过程中检测可能的污染来降低风险的方法之一。 定期评估环境监测程序的有效性和完整性非常重要，并且对环境监测数据进行趋势分析以寻找可以更好控制的区域。 当然，一个完善的环境监测程序也更符合合规，在提高产品质量同时也能确保患者的安全。如果您想了解真多关于微生物学的知识，您也可以访问我们Micro-Learnings系列课程。